Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) – це метод, який використовується в біологічних та молекулярно-генетичних дослідженнях для збільшення певної ДНК або РНК послідовності.
Для проведення ПЛР необхідні такі компоненти:
1. Матриця ДНК чи РНК – вихідний матеріал, що містить фрагмент ДНК або РНК, який потрібно збільшити. Матриця може бути отримана з клітин, тканин чи рідин організму.
2. Праймери – короткі однолінійні олігонуклеотидні послідовності, які обернено комплементарні кінцевим ділянкам шуканої ДНК або РНК. Праймери є відправною точкою для початку ПЛР реакції.
3. Дезоксирибонуклеотиди (dNTP) – будівельні блоки, з яких синтезується новий ДНК ланцюг у процесі ПЛР. Вони являють собою чотири види нуклеотидів: дезоксіаденілову трифосфату (dATP), дезоксицитидинову трифосфату (dCTP), дезоксигуанілову трифосфату (dGTP) і дезокситимідинову трифосфату (dTTP).
4. Термостабільна ДНК-полімераза – фермент, який синтезує новий ланцюг ДНК, використовуючи матрицю ДНК та праймери. Термостабільна ДНК-полімераза має здатність витримувати високі температури, що є важливим для проведення ПЛР реакції.
5. Буферна реакційна суміш – Розчин, що містить оптимальну концентрацію ДНК-полімерази та інших реагентів для проведення ПЛР. Буферна суміш підтримує необхідні умови pH та іонну силу реакційної суміші.
p align="justify"> Проведення ПЛР вимагає точного співвідношення всіх компонентів і певних умов температури і часу, щоб досягти успішної ампліфікації вихідної ДНК або РНК послідовності.
| Компонент | Опис |
|---|---|
| Препарат ДНК | Вихідний матеріал для проведення ПЛР, що містить ДНК, що вивчається |
| Праймери | Короткі однониткові олігонуклеотиди, необхідні для посилення ділянки ДНК, що цікавить. |
| Термостабільний полімеразний фермент | Забезпечує синтез нових ДНК-ланцюгів |
| Дезоксирибонуклеозидтрифосфати (dNTP) | Блоки дезоксирибонуклеотидів, необхідні для синтезу нових ДНК-ланцюгів |
| Буферна суміш | Містить оптимальні умови для проведення ПЛР, підтримує необхідний рН та концентрацію магнію |
| Магній | Кофактор для роботи полімеразного ферменту, впливає на його активність |
| Теплоциклер | Спеціальне обладнання, яке забезпечує необхідні температурні режими для проведення ПЛР |
| Контрольні зразки | Позитивні та негативні зразки ДНК, що використовуються для перевірки працездатності методики ПЛР |
Які компоненти потрібні для ПЛР?
Для проведення ПЛР у найпростішому випадку потрібні такі компоненти:
- ДНК-матриця, що містить ту ділянку ДНК, яку потрібно ампліфікувати;
- два праймери, комплементарні кінцям необхідного фрагмента;
- термостабільна ДНК-полімераза;
- дезоксинуклеотидтрифосфати (A, G, C, T);
Що є необхідною умовою для проведення ПЛР?
Для проведення ПЛР у найпростішому випадку потрібні такі компоненти: ДНК-матриця, що містить ту ділянку ДНК, яку потрібно ампліфікувати. Два праймери, комплементарні протилежним кінцям різних ланцюгів необхідного фрагмента ДНК.
Що є основою методу ПЛР?
В основі методу ПЛР лежить багаторазове подвоєння певної ділянки ДНК за допомогою ферментів у штучних умовах (in vitro). Через війну напрацьовуються кількості ДНК, достатні візуальної детекції.
Яка послідовність етапів ПЛР правильна?
ПЛР-аналіз ДНК у лабораторії включає три етапи: виділення; амплікація фрагментів; детекція продуктів амплікації.